단백질의 분쇄 및 원심분리 다운받기
[목차]
▣ 단백질의 분쇄 및 원심분리
(1) Homogenizer
(2) Centrifuge
▣ Salting Out
(1) 염석 (Salting Out)
▣ Dialysis
5. Chromatography
6. 전기영동 (Electrophoresis)
7. Protein의 농도측정
7. 단백질의 농도 계산
Ⅲ. 실험결과
1. 전기영동 실험결과
④ washing solution (25㎕)
⑤ elution solution (14㎕)
⑥ size marker (12㎕)
⑦ high weight size marker (5㎕)
5. 전기영동 장치에 전하를 걸어준다.
6. gel을 탈색시켜 관찰한다.
7. Protein의 농도측정
(1) 단백질의 정량
모든 종류의 단백질의 농도를 결정할 수 있는 완벽한 방법은 지금까지 알려져 있지 않다. 따라서 단백질의 양을 정량하기 위해서는 단백질의 본질, 단백질 시료에 있는 다른 성분들의 본질, 정량분석의 신속도, 및 정밀도 등에 따라서 적당한 방법을 선택하여야 한다.
1) 뷰렛 시험 (buret test)
2) Lowry 시험 (Folin-Ciocalteau)
Lowry등이 고안한 이 단백질 정량분석법은 용액에 있는 단백질뿐 아니라 건조된 시료에도 이용될 수 있다. 특히 이 정량방법은 5㎍/㎖정도의 단백질 양을 정량할 수 있는 대단히 민감한 방법이어서 널리 쓰이고 있다. 이 Lowry 방법에서 사용하는 Folin-Ciocalteau시약에 의한 발색은 뷰렛 시험에서와 마찬가지로 단백질과 알칼리성 구리와의 반응과 포스포몰리브덴산-포스포텅스텐산 염들이 단백질에 있는 티로신과 트립토판 들에 의한 환원반응으로 생긴다. 이 두 아미노산의 함량은 단백질의 종류에 따라서 상당히 다르므로 1mg의 단백질에 대한 색의 세기가 일정하지가 않다. 표준곡선을 결정하는 데 사용한 단백질이 나타내는 색의 세기와 다를 수 있다. 그럼에도 불구하고 이 방법은 단백질을 정제하는 과정에 있어서 단백질의 함량변화를 측정하는 데는 매우 유용한 방법이다.
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