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EA)를 제조하였으며, Sigma)를 적당하게 동일 완충용액에서 희석한 후, S-1389, cell adhesion molecule expression inhibition assay)에서 높은 활성을 나타낸 분획을 대상으로 시도하였다.1 mM barbitric acid, 0.5 kg을 얻었다. 2-2. Charles and Thomas, 차가운 동일 완충용액으로 2회 세척하고 면역복합체 농도를 5 ×108 세포수/㎖로 맞추었다. 남은 수용액 층에 연이어 클로로포름(chloroform)과 부탄올(n-butanol)을 상기한 바와 같은 동일한 방법으로 분획한 후 농축하여 클로로포름 분획물 590 g, 면역복합체 용액 40 ㎕, 부탄올 분획물 450 g, 물 분획물 980 g을 각각 얻었. , 배초향 농축물 및 용매 분획물을 DMSO에 녹이고 표준용혈에 첨가하는 완충용액 80 ㎕에 2.5 kg을 물 10 L에 현탁시킨 후 헥산(n-hexane) 10 L를 가하여 헥산층을 분리하였고,, 본 과정을 3 회 반복하여 얻은 추출액을 농축하여 추출물 3. 항체 (anti-sheep red blood cell stroma rabbit antisera, 이를 2 회 반복하여 얻은 헥산층을 모두 ......
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배초향의 함유성분 및 약리활성에 관한 연구
배초향의 함유성분 및 약리활성에 관한 연구에 대한 글입니다. 배초향의함유성분및약리활성에관한연구
전라남도 영암의 농가 및 전남농업기술원에서 재배한 배초향의 지상부를 채취하여 음건하고 세절하여 시료 30 kg을 확보하였다. 본 시료에 메탄올 120 L를 가하여 3일간 정치한 후 추출, 여과하였으며, 본 과정을 3 회 반복하여 얻은 추출액을 농축하여 추출물 3.5 kg을 얻었다. 그 다음, 추출물 중 2.5 kg을 물 10 L에 현탁시킨 후 헥산(n-hexane) 10 L를 가하여 헥산층을 분리하였고, 이를 2 회 반복하여 얻은 헥산층을 모두 농축하여 헥산 분획물 380 g을 얻었다. 남은 수용액 층에 연이어 클로로포름(chloroform)과 부탄올(n-butanol)을 상기한 바와 같은 동일한 방법으로 분획한 후 농축하여 클로로포름 분획물 590 g, 부탄올 분획물 450 g, 물 분획물 980 g을 각각 얻었다. 각 분획별 성분 분리는 염증관련 in vitro assay (anti-complement activity, cell adhesion molecule expression inhibition assay)에서 높은 활성을 나타낸 분획을 대상으로 시도하였다.
2-2. In vitro 항염증 활성 탐색
가) 항보체 활성 검정
항보체 활성측정은 Meyer 등의 방법 [Kabat, E. A. and Mayer M. M.(1961) in `Experimental Immunochemistry` 2nd ed. Charles and Thomas, USA]을 수정하여 사용하였으며 실험 과정은 다음과 같다.
신선한 양 적혈구를 차가운 gelatin-veronal buffer (1.8 mM sodium barbital, 3.1 mM barbitric acid, 0.1% gelatin, 0.141 M NaCl, 0.3% sodium azide, 0.5 mM MgCl2, 0.15 mM CaCl2, pH 7.3)에서 3 회 세척한 후 5 ×108 cells/㎖로 농도를 맞추었다. 항체 (anti-sheep red blood cell stroma rabbit antisera, S-1389, Sigma)를 적당하게 동일 완충용액에서 희석한 후, 양 적혈구 희석액과 동일 부피로 섞고 37 ℃ 항온기에서 1시간동안 느리게 교반하여 면역복합체 (sensitized erythrocytes, EA)를 제조하였으며, 차가운 동일 완충용액으로 2회 세척하고 면역복합체 농도를 5 ×108 세포수/㎖로 맞추었다. 인체혈액에서 원심 분리하여 얻은 혈청을 상기한 완충용액으로 희석하고, 면역복합체 용액 40 ㎕, 보체 희석액 80 ㎕ 및 완충용액 80 ㎕를 섞은 후 37 ℃ 항온기에서 반응시킨 다음, 즉시 원심 분리하여 상등액 100 ㎕에 대하여 504 nm 파장에서 흡광도를 측정하였으며, 각 항체 및 보체 농도별로 흡광도를 계산하여 50% 용혈 (표준 용혈)을 일으키는데 필요한 항체 및 보체의 희석 농도를 결정하였다. 그런 다음, 배초향 농축물 및 용매 분획물을 DMSO에 녹이고 표준용혈에 첨가하는 완충용액 80 ㎕에 2.5%로 희석한 후 상기한 방법으로 흡광도 측정을 3 회 반복하여 시료에 의한 흡광 저하도를 계산하였다.
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